Atividade insecticida e efeito de biocontrol do Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirus ((AcMNPV) nas larvas de Spodoptera frugiperda

Abstrato

A lagarta do funil do milho, Spodoptera frugiperda, é uma das pragas mais importantes do milho, que invadiu recentemente a China. Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) em larvas de S.frugiperda, a atividade inseticida e o efeito de biocontrole de AcMNPV em S.frugiperda foram estudados e analisados ​​pelos métodos de bioensaio e teste de eficácia de campo.₅₀)de AcMNPV atuando no 2^elarvas de ínstar de S.Frugiperda foi 2,9x 10⁷PIB/mL. A eficácia média do controle de 10⁷Suspensão de PIB/mL AcMNPV+Bt(1500 mL/hm²) em S.frugiperda foi de 68,99% no dia 10^ºdia e 66,87% no dia 15^ºdia após a administração. Finalmente, o software DNAMAN 6.0 foi usado para identificar a homologia de DNA dos insetos mortos, e os resultados mostraram que as sequências dos genes polh, lef-8 e lef-9 do inseto morto e do S．Frugiperda eram 100 % idêntico. Todos os resultados acima poderiam verificar ainda que AcMNPV pode desempenhar um papel fundamental no controle de S．frugiperda. Sugere-se que 10⁷PIB/mL AcMNPV＋Bt suspensão (1500mL/hm²)deve ser aplicado no pico de ocorrência das larvas jovens de S.frugiperda, e após as 16h00-17h00 do dia ensolarado para evitar a influência de alta temperatura e luz, para que a preparação do vírus possa ter um melhor desempenho papel e melhorar seu efeito de controle sobre S.frugiperda．

Palavras-chave: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;Praga de lepidópteros;larval;biopesticida;AcMNPV＋ Suspensão Bt;atividade inseticida;prevenção e controle verde

Spodoptera frugiperda é uma praga migratória onívora que entrou pela primeira vez na China vinda de Mianmar em 2019 e se espalhou rapidamente por 1.518 distritos em 26 províncias e municípios da China, representando uma séria ameaça à segurança alimentar da China.Até agora, na estratégia de controle da lagarta do funil do funil, o controle do surto da lagarta do funil ainda depende do uso intenso de pesticidas químicos.O uso excessivo de pesticidas químicos pode facilmente causar resistência a pragas, resíduos e poluição ambientais excessivos.Uma série de problemas graves restringiu seriamente o desenvolvimento sustentável da agricultura moderna. Portanto, o uso de métodos de controle biológico ou substituição de biopesticidas.O uso de pesticidas para controlar a lagarta do funil do funil está se tornando cada vez mais importante e tem recebido cada vez mais atenção.

Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV é um vírus de poliedrose nuclear incorporado em vários grãos isolado da larva de Argyria alfalfa. Ele pode infectar cruzadamente mais de 30 tipos de pragas de lepidópteros, como traça da beterraba, traça do repolho, Argyria argyra e Calyptera teristoides, o tipo misto com Bt e outros inseticidas e vírus de pragas não alvo como sinergistas tem efeito sinérgico óbvio em muitas pragas de Noctuidae e amplia ainda mais o espectro inseticida e melhora o efeito inseticida.AcMNPV é um novo biopesticida de vírus de insetos desenvolvido pela Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD.É uma combinação do vírus da poliedrose nuclear Argyria alfalfa e do potente sinergista do vírus Bt.Com boa atividade inseticida, A tem sido amplamente aplicado em hortaliças, árvores frutíferas, arroz e outros campos.Neste artigo, a atividade inseticida e o efeito de biocontrole do nucleopoliedrovírus múltiplo de Autographa californica (AcMNPV) contra Spodoptera frugiperda foram detectados e avaliados por ensaio de atividade de laboratório e experimento de campo, a fim de fornecer suporte de dados para a ampla aplicação do vírus da poliedrose nuclear em o controle biológico de Spodoptera frugiperda em milho.Fornece base teórica para registro e aplicação do agente de suspensão de AcMNPV mais Bt no controle da lagarta do funil do funil.

1.Materiais e métodos

1.1Testar vírus e agentes biológicos

O vírus testado foi o nucleopoliedrovírus múltiplo Autographa californica (AcMNPV). Em 20 de maio de 2019, Spodoptera frugiperda foi coletado no campo de milho na cidade de Xiantao, província de Hubei, e o teste de triagem de infecção pelo vírus foi realizado no laboratório da Wuhan Unioasis Biological Technology Co. , LTD.(Em que Autographa Californica multiplenucleopolyhedrovirus AcMNPV tem alta atividade infecciosa contra Spodoptera frugiperda),As larvas de Spodoptera frugiperda foram criadas para aumentar e se propagar.As larvas mortas infectadas com o vírus foram moídas com água, filtradas em 3 camadas de gaze e o filtrado foi centrifugado a 600r/min e 300r/min. A microcontagem foi de 1,8 ×10¹⁰poliedros virulentos por mL(PIB de corpo de inclusão poliédrica), ou seja, obter um grau técnico puro do vírus da poliedrose(1,8 x 10¹⁰PIB/mL), conservado em baixa temperatura e reservado.

O agente biológico testado foi a poliedrose nuclear Autographa california.Bacillus thuringiensis abreviadamente AcNPV.Bt (1,0 ×107 PIB/mL).É desenvolvido pela Wuhan Unioasis Bilogical Technology Co., LTD e produzido por sua subsidiária Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD.

1.2Teste insetos

O inseto experimental foi Spodoptera frugiperda.Em 20 de julho de 2019, as larvas de Spodoptera frugiperda foram coletadas no campo de milho de verão na vila de Banqiao, cidade de Dachangzhen, condado de Tongshan, província de Hubei, e trazidas de volta ao laboratório de proteção de plantas do Instituto de Pesquisa de Solos e Fertilizantes da Academia de Agricultura de Hubei. Ciências.Folhas de milho frescas e tenras foram alimentadas com uma única cabeça em placas de Petri plásticas descartáveis ​​(diâmetro 8cm, altura 3cm).As condições de alimentação interna foram :(25±1) ℃ e umidade relativa 60%-70%, o fotoperíodo é 16L:8D.Após múltiplas gerações de reprodução, blocos de ovos frescos e esterilizados são retidos para uso.

1.3Atividade laboratorial do nucleopoliedrovírus múltiplo Autographa californica (AcMNPV) contra spodoptera frugiperda

Seis gradientes de concentração, 1,0 ×10⁹, 1,0 × 10⁸, 1,0 × 10⁷, 1,0 × 10⁶, 1,0 × 10⁵, 1,0 × 10⁴foram projetados neste experimento. Primeiro, o TC de AcNPV foi diluído para 1,0 ×10⁹PIB/mL, e depois diluído 10 vezes para obter outros diluentes com diferentes concentrações. O experimento foi tratado com controle branco. Foram realizados um total de 7 processos, sendo cada processo repetido 3 vezes.

Foi adotado o método de alimentação por segmento foliar, ou seja, folhas jovens de milho fresco (comprimento 2 cm x largura 2 cm) foram primeiro tratadas com spray de suspensão de vírus, depois as larvas foram alimentadas e as cabeças únicas foram alimentadas em placas de Petri.As tiras de alimentação foram: temperatura (25±1)℃, fase-umidade (60% ~ 70%), fotoperíodo (16L:8D).Depois que as folhas de milho tóxicas forem consumidas, folhas frescas de milho não tóxicas devem ser adicionadas imediatamente.48 larvas de segundo ínstar da lagarta do funil foram tratadas repetidamente. Referência parte 9{9-11}, Considerando as mudanças na proliferação do vírus nas células e hospedeiros da família das mariposas, o número de insetos mortos devido ao vírus e o número total de insetos mortos foi investigado aos 7 e 10 dias após a infecção, e a taxa de mortalidade foi calculada e a CL50 foi calculada.

1.4Teste de campo sobre o efeito de controle de 10 milhões de suspensões de AcMNPV.Bt em larvas da lagarta do funil

O teste de eficácia de campo foi realizado no campo de milho de verão da aldeia de Xiaoyuan, cidade de Chuangwang, condado de Tongshan, província de Hubei.A parcela de teste tem um total de 1500m^２, o tipo de solo é cálcico, o valor do pH é 6,8, o teor de matéria orgânica é 13,9% e a fertilidade é média a alta.O milho é plantado o ano todo, e a variedade de milho é Xiyu nº 3. Em 13 de julho ,2020, 45% de fertilizante composto 750kg//hm^２será aplicado como fertilizante base e semeado.Desde 2019, tem havido uma ocorrência grave da lagarta do funil do milho neste campo.

Um total de 10 milhões de suspensões de AcMNPV.BT (1500mL/hm²) e benzoato de emamectina 15%. Suspensão de indocarbe (300mL/hm²), o inseticida comumente usado e o controle em branco foram tratados com 3 tratamentos.Cada tratamento foi repetido 4 vezes, totalizando 12 parcelas experimentais, cada uma cobrindo uma área de 100m²

Na tarde de 26 de agosto de 2020 (quando as larvas de Spodoptera frugiperda ocorrem com frequência), pulverize o pesticida uma vez à noite.É usado o spray elétrico de mochila multifuncional da marca Lebang 3WBJ-16DZ, com pressão de trabalho de 0,40 ~ 0,60 MPa, diâmetro do orifício de 1 mm e vazão de 60 ~ 85L / h.O dia da aplicação do pesticida é ensolarado, com temperatura de 23-32 ℃.Realizar pesquisas no 1º, 3º, 5º, 7º, 10º e 15º dia após a aplicação.Durante a investigação foram retirados 10 pontos amostrais aleatórios de cada parcela, e 10 plantas foram continuamente pesquisadas em cada ponto, totalizando 100 plantas.Foram registrados o número de insetos vivos, mortes, envenenamentos e inimigos naturais em cada planta de milho.A fórmula de cálculo relevante é a seguinte;

Taxa de diminuição de insetos =(número de insetos vivos antes da aplicação - número de insetos vivos após a aplicação)/número de insetos vivos antes da aplicação

Efeito de prevenção e controle =( Diminuição da taxa de insetos na área de tratamento - Diminuição da taxa de insetos na área de controle)/(100 - Diminuição da taxa de insetos na área de controle) * 100%

1,5Identificação molecular de ACMNPV

1) Teste amostras de vírus.Selecione o licor-mãe ACMNPV para determinação de atividade interna (amostra 1), preparação biológica 10 milhões de ACMNPV.Bt SC (amostra 2), cadáveres de insetos infectados por vírus após teste de eficácia de campo (amostra 3) e as larvas de segunda geração de lagarta do cartucho infectadas com cadáveres de insetos coletados na amostra 3 (amostra 4) como amostras de vírus de teste, para verificar se o AcMNPV nos 10 milhões de ACMNPV.Bt tem atividade bactericida contra larvas da lagarta do cartucho.

2) Extração de DNA.Pegue 1,0 mL de amostra de AcMNPV, adicione 99,0 mL de água destilada e oscile completamente por 1 minuto.Tome 300μL de suspensão após a oscilação, adicione 100μL de solução alcalina de craqueamento, banho-maria a 37 ℃ por 30 minutos.Adicione 200 μL de tampão Tris·HCl e centrifugue a 10.000 r/min por 8 minutos.Leve o sobrenadante para um tubo de centrífuga, adicione 5μL de Protease K e 60 μL de SDS, banho-maria a 65 ℃ por 2 horas, remova e deixe esfriar até a temperatura ambiente.Adicione 650 μL de fenol saturado Mix L Tris, centrifugue a 10.000 r/min por 5 minutos e leve o sobrenadante para um novo tubo de centrífuga.Adicione 650μL de líquido misto de mistura de fenol e clorofórmio (proporção de volume 1:1), centrifugue a 10.000 r/min por 5 minutos e, em seguida, leve o sobrenadante para um novo tubo de centrífuga.Adicione 650μL de líquido misto de clorofórmio e álcool isoamílico (proporção de volume 24:1), centrifugue a 10.000 r/min por 5 minutos e, finalmente, leve o sobrenadante para um novo tubo de centrífuga.Meça a concentração de DNA usando um espectrofotômetro.

3) amplificação por PCR.Usando o sistema padrão super mix T3: amostra de DNA 2 μ L. 0,5 μL de primers para antes e depois, super mix T3 18 μL e ddH₂O7μL.A condição de amplificação PCR é 95 ℃.Após 3 minutos de pré-desnaturação, os seguintes ciclos são realizados: 98 ℃ por 15 segundos, 52 ℃ por 20 segundos, 72 ℃ por 20 segundos e finalmente 72 ℃ por 5 minutos, totalizando um ciclo de 42 vezes.

4) Eletroforese em gel de DNA agarose.Pegue o produto de amplificação por PCR 2μL e o marcador de DNA de 5 kb e coloque em gel de agarose e eletroforese a 180 V por 20 min.Após a eletroforese, observe os produtos de PCR no sistema de imagem em gel.

Primer a montante de Polh:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

Polh cartilha a jusante:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

Primer a montante Lef-8:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

Iniciadores a jusante Lef-8:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

Iniciadores a montante Lef-9

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG

Iniciadores a jusante Lef-9:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

Finalmente, aplique o software DNAMAN6.0 para comparar as sequências medidas de polh, lef-8 e lef-9.

1.6Análise e processamento de dados

Os dados experimentais foram processados ​​utilizando o software de análise estatística de dados IBM SPSS 22.0.

No experimento de determinação da atividade inseticida do vírus, o número de insetos mortos e vivos tratados com cada concentração é contado, e a taxa de mortalidade e a porcentagem ajustada de mortos são calculadas e convertidas em valores de probabilidade.A concentração de cada tratamento é convertida em valores de lg.A equação de regressão de virulência (inclinação ± SE) é calculada através de valores e pesos de probabilidade de trabalho, e LC₅₀Valor e seu limite de confiança de 95% e finalmente realizar o teste qui-quadrado(²).No experimento de efeito de controle de campo, foi contado o número de insetos vivos em cada tratamento e calculada a taxa de redução de pragas.O efeito de controle foi calculado usando a fórmula de edição do Microsoft Excel.O método de Duncan foi utilizado para análise e ANOVA unidirecional para comparar as diferenças significativas entre os tratamentos

Os gráficos do texto foram todos criados no software Microsoft Excel.

2.Resultados e Análise

2.1Atividade inseticida de AcMNPV contra larvas de Spodoptera frugiperda

Os resultados dos testes de atividade interna (Tabela 1) mostram que após 7 dias de tratamento, o LC₅₀de AcMNPV atua em larvas de 2º ínstar de Spodoptera frugiperda é 4,1x10⁷PIB/mL e a CL₉₀é 1,05x10⁸PIB/mL.Após 10 dias de tratamento, o LC₅₀de AcMNPV atua em larvas de 2º ínstar é 2,9x10⁷PIB/mL e a CL₉₀é 7,8x10⁷PIB/mL.O LC₅₀e LC₉₀dos atos de AcMNPV nas larvas de 2º ínstar da lagarta do funil do cartucho após 7 dias de tratamento foram ambos superiores a 10 dias, indicando que o AcMNPV exibiu boa atividade inseticida contra larvas de Spodoptera frugiperda aos 7 dias.

2.2 Efeito de controle de campo do AcMNPV.Bt atua em larvas de Spodoptera frugiperda

Os resultados dos ensaios de eficácia de campo mostraram que 10 milhões de AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) teve um efeito relativamente lento nas larvas de spodoptera frugiperda.O efeito médio de controle no 1º, 3º e 5º dia após a pulverização foi de 11,57%, 16,23% e 15,56%, respectivamente.O efeito médio de controle no 7º dia após a pulverização foi de apenas 21,88%.No entanto, no 10º dia após a pulverização, o efeito de controle de insetos aumentou repentinamente para 68,99%, e o efeito de controle médio no 15º dia após a pulverização também foi de 66,87%.Porém, comparado aos agentes químicos Benzoato de Emamectina+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm²), teve um bom efeito letal nas larvas de spodoptera frugiperda, o que pode reduzir rapidamente o número da população de insetos.O efeito de controle médio no 1º, 3º, 5º e 7º dia após a medicação foi de 91,39%, 92,66%, 90,71% e 87,19%, respectivamente.Porém, o efeito de controle médio no 10º dia começou a diminuir, apenas para 67,63%, e o efeito de controle médio no 15º dia diminuiu para 51,60%.Consulte a Tabela 2 para obter detalhes.

Ao mesmo tempo, também constatamos que a taxa de diminuição de insetos na área controle foi negativa no 1º, 3º e 5º dia após o tratamento, indicando aumento no número de insetos.No 7º dia após o tratamento, começou a ficar positivo (a população de insetos começou a diminuir).A taxa média de diminuição do inseto no 10º e 15º dias foi de 38,25% e 47,00% respectivamente, o que é altamente provável relacionado ao fato de que algumas das larvas de spodoptera frugiperda começaram a pupar no solo e as gerações se sobrepuseram após 10-15 dias .

Em resumo, percebe-se que os 10 milhões de AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) tem certo efeito de controle sobre spodoptera frugiperda, mas seu efeito é lento e sua eficácia é de cerca de 10 a 15 dias após a aplicação.

2.3 Efeitos do AcMNPV.Bt em inimigos naturais

Durante experimentos de campo, os efeitos de 10 milhões de AcMNPV.A suspensão de Bt sobre inimigos naturais de pragas do milho, como aranhas, joaninhas e besouros, também foi investigada.Os resultados mostraram que 10 milhões de AcMNPV.A suspensão Bt não causou danos significativos aos inimigos naturais como aranhas, joaninhas e besouros, com média de 13,4 inimigos naturais por 100 plantas.No entanto, os agentes químicos Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% suspensão tiveram efeito tóxico significativo sobre inimigos naturais como aranhas, joaninhas e besouros.No primeiro dia após o tratamento, o número médio de inimigos naturais em 100 plantas de milho foi de apenas 3,1, e no terceiro dia após o tratamento foram encontrados apenas 5,2 inimigos naturais de vários tipos (Figura 1).Pode-se observar que os 10 milhões de AcMNPV.A suspensão Bt tem um bom efeito protetor sobre os inimigos naturais das pragas, enquanto a suspensão Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% causa danos relativamente maiores aos inimigos naturais.

2.4 Identificação molecular de AcMNPV

Os resultados da amplificação por PCR de diferentes amostras de teste mostraram que os fragmentos de amplificação de polh, lef-8 e lef-9 das amostras 1, 2, 3 e 4 eram consistentes e de tamanho correto.Os produtos de PCR dos genes polh, lef-8 e lef-9 foram 0,54, 0,716 e 0,29 kb, respectivamente (Figura 2), o que comprova que o AcMNPV possui atividade inseticida contra larvas de spodoptera frugiperda.

Finalmente, o software DNAMAN 6.0 foi utilizado para realizar o alinhamento de sequências nos fragmentos amplificados de polh, lef-8 e le.f-9 nas amostras 1, 2, 3 e 4 (Figura 3).Os resultados mostraram que a similaridade entre as sequências amplificadas de polh, lef-8 e lef-9 nas amostras 1, 2, 3 e 4 foi de 100%, indicando que as amostras 1, 2, 3 e 4 são originárias do mesmo vírus AcMNPV.

3. Discussão

AcMNPV é um vírus em forma de bastão de inseto que infecta o corpo dos insetos através da alimentação.O vírus prolifera e se espalha por todo o corpo do inseto, infectando gradualmente todo o corpo e, por fim, levando à morte.Os resultados deste estudo indicam que o AcMNPV possui boa atividade biológica contra larvas de Spodoptera frugiperda.Sua CL no 7º e 10º dias foi de 4,1x107 e 2,9x107PIB/m, respectivamente, e apresentou bons efeitos de controle em campo.A suspensão mista de 10 milhões de AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) teve bons efeitos médios de controle no 10º e 15º dias após o tratamento, atingindo 68,99% e 66,87% respectivamente, e foi seguro para inimigos naturais.Portanto, a velocidade de pesquisa e desenvolvimento deve ser acelerada para que o AcMNPV possa desempenhar um papel maior no controle biológico de Spodoptera frugiperda.A suspensão de 10 milhões de AcMNPV.Bt produzida pela Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. é um composto de AcMNPV e do biopesticida Bacillus thuringiensis (Bt), que pode melhorar significativamente a atividade inseticida do vírus.Como o Bt é um inseticida de amplo espectro com boa atividade inseticida microbiana, quando o AcMNPV é combinado com o Bt, sua toxicidade deve ser significativamente melhorada em comparação com uma única formulação.Isto não só expande a gama inseticida do Bt, mas também aumenta a sua toxicidade, atingindo o objetivo de usar uma única formulação para controlar múltiplas pragas.Esta é também a razão pela qual a suspensão de 10 milhões de AcMNPV.Bt pode ser amplamente promovida em vegetais, árvores frutíferas e arroz.Portanto, 10 milhões de AcMNPV.Bt podem ser promovidos como agente de controle verde para Spodoptera frugiperda em milho

Neste estudo, ao realizar testes de eficácia de campo, no caso de rápido declínio na população de insetos na área de controle (a taxa de diminuição de insetos no 15º dia atingiu 47,00%), o efeito de controle médio dos 10 milhões de AcMNPV.Bt suspensão (1500mL/hm²) no 15º dia após o tratamento foi de 66,87%, mostrando uma rápida tendência ascendente.Enquanto o efeito médio de controle do pesticida químico 15% metoxazol · indefencarbe SC (300 mL/hm²) no 15º dia após o tratamento diminuiu para 51,60%.Embora se possa observar que a suspensão de 10 milhões de AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) tem certo efeito de controle sobre Spodoptera frugiperda no 10º ao 15º dia, considerando a lenta eficácia dos pesticidas biológicos e a curta vida útil e gerações sobrepostas de larvas de Spodoptera frugiperda, recomenda-se aumentar o número de investigações e estender o tempo de investigação quando realização de testes de eficácia de campo de pesticidas biológicos (especialmente preparações virais), que podem alcançar resultados experimentais mais ideais.Esta também é uma limitação deste estudo.Em resumo, em comparação com os agentes biológicos, os agentes químicos têm um efeito mortal relativamente maior sobre as pragas e têm efeito rapidamente.Eles podem ser usados ​​como medida emergencial de prevenção e controle durante surtos de pragas.Quando os danos causados ​​pelas pragas ocorrem de forma relativamente leve, os pesticidas biológicos podem substituir os pesticidas químicos como uma das medidas verdes de prevenção e controle, reduzindo assim a poluição ambiental e alcançando o efeito de proteger a ecologia agrícola.

Além disso, o gene Polh (poliedrina) utilizado neste estudo é um tipo de promotor de proteína poliédrica, ele e P10 são os promotores mais comumente utilizados no sistema de vetores de expressão de baculovírus (BEVS), ambos altamente expressos no estágio tardio. de infecção viral^[13].No entanto, a actividade do promotor p10 é inferior à do promotor polh, pelo que o promotor polh é frequentemente utilizado para a expressão de proteínas exógenas.O gene lef-8 pode codificar a maior subunidade da RNA polimerase do próprio vírus e é um tipo de fator de expressão tardia^[14].lef-9 é um tipo de fator de expressão tardia que cocodifica a subunidade do complexo proteico com lef-4, lef-8 e p47 em baculovírus.A pesquisa descobriu que os vírus sem o gene lef-9 não podem gerar partículas virais com atividade infecciosa, enquanto os vírus com o gene lef-9 podem restaurar a atividade infecciosa do vírus, restaurando-o.Portanto, o gene lef-9 é um gene essencial para que o baculovírus forme BV (Budded Virus) com atividade infecciosa^[15].Pode-se observar que os genes lef-8 e lef-9 apresentam alto conservadorismo em diferentes tipos de vírus de poliedrose nuclear, portanto os genes lef-8 e lef-9 podem ser usados ​​como base para a identificação de tipos de vírus.Portanto, este estudo utilizou polh, lef-8 e lef-9 como objetos de detecção e, através do alinhamento de sequências genéticas, a homologia foi alta, chegando a 100%.O método de detecção molecular rápida verificou mais uma vez que o AcMNPV possui boa atividade inseticida contra Spodoptera frugiperda, o que é adequado para posterior promoção e aplicação na prevenção e controle de Spodoptera frugiperda.

Desde 2019, a Spodoptera frugiperda invadiu a China e se tornou uma importante praga do milho.Formou uma população estabelecida em algumas áreas do sul e sudoeste da China, causando enormes perdas à indústria do milho da China e ameaçando seriamente a segurança alimentar da China.^[16].Diante da atual grave situação de prevenção e controle de Spodoptera frugiperda na China, é urgente acelerar a triagem e o desenvolvimento de pesticidas eficientes para a prevenção e controle de Spodoptera frugiperda^[17].Embora os insecticidas virais tenham limitado a sua ampla aplicação devido à sua lenta taxa de acção e ao estreito espectro insecticida, no contexto da crescente atenção à ecologia e à protecção ambiental, espera-se que os insecticidas baculovírus sejam cada vez mais utilizados na produção agrícola devido às suas vantagens significativas sobre pesticidas tradicionais.Devido à suscetibilidade das preparações de vírus de insetos a condições externas, como alta temperatura, luz solar, chuva e idade das pragas[18].Portanto, recomenda-se a aplicação de agrotóxicos no período de pico de ocorrência de larvas de pragas.É melhor usá-lo depois das 16h00 às 17h00 em dias ensolarados para evitar o impacto de condições ambientais adversas, como alta temperatura e luz, para que a formulação do vírus possa desempenhar melhor seu papel e melhorar o efeito de controle de pragas. .